人原代直腸平滑肌原代細胞

商品屬性：

細胞基本屬性：

種屬來源：人

組織來源：直腸直腸

生長特性：貼壁生長

產(chan) 品規格：5x105cells/T25細胞培養(yang) 瓶
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%胰蛋bai酶

產(chan) 品貨期：7-8周左右

運輸方式：T25培養(yang) 瓶/ 順豐(feng) 快遞（包郵）

供應限製：僅(jin) 限於(yu) 科學研究，絕不可作為(wei) 動物或人類疾病的治療產(chan) 品使用

背景介紹：:人直腸平滑肌細胞采用胰蛋bai酶-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法製備而來，人直腸平滑肌細胞分離自直腸組織；直腸為(wei) 大腸的未段，位於(yu) 小骨盆內(nei) 。上端平第3骶椎處接續乙狀結腸，沿骶骨和尾骨的前麵下行，穿過盆膈，下端以而終。直腸上端的大小似結腸，其下端擴大成直腸壺腹，是糞便排出前的暫存部位，最下端變細接肛管。直腸在盆腔內(nei) 的位置與(yu) 骶椎腹麵關(guan) 係密切，與(yu) 骶椎有相同的曲度。直腸周圍多脂肪、無縱帶，位於(yu) 膀胱和生殖器官的背側(ce) 。直腸平滑肌細胞原代分離培養(yang) 3天後，可見細胞貼壁伸展，細胞形態大小不一，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周後細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐(feng) 富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為(wei) 旋渦狀或柵欄狀。傳(chuan) 代後細胞生長較快，4-6天即可匯合，並保持上述形態學特征和生長特點。直腸的動脈血供主要是來自腸係膜下動脈的直腸上動脈，來自髂內(nei) 動脈的直腸中動脈和來自髂內(nei) 動脈的直腸下動脈。平滑肌收縮是胃腸蠕動中基本的運動方式；腸炎時由於(yu) 平滑肌特殊肌動蛋白的增加導致了平滑肌層的增厚。平滑肌肌動蛋白可能影響收縮力的產(chan) 生，這進一步證明了炎症時的腸平滑肌細胞具有可塑性。利用腸平滑肌細胞的培養(yang) ，可以幫助了解收縮、增殖和胃腸道結締組織對平滑肌細胞的反應。

細胞培養(yang) 操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yang) 瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

傳(chuan) 代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang)

傳(chuan) 代代數可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態

傳(chuan) 代比例傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代，1:2傳(chuan) 代就是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) T25瓶或者2個(ge) 6cm皿。不是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) 10cm皿

傳(chuan) 代方法：

1.吸出T25細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yang) 瓶中，輕微轉動培養(yang) 瓶至消化液覆蓋整個(ge) 培養(yang) 瓶底後，吸出多餘(yu) 消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後，再加入5ml培養(yang) 基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yang) 瓶傳(chuan) 代，然後補充新鮮的培養(yang) 基至5mL，置於(yu) 37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置培養(yang) ；

4.待細胞貼壁後，培養(yang) 觀察；之後每2-3天換液一次新鮮的培養(yang) 基。

原代細胞培養(yang) 的主要步驟包括：

‌一、剝離組織，去除外膜、結締組織等‌：將組織從(cong) 動物體(ti) 中取出，並去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、‌洗滌後將組織剪成1mm左右的小塊‌：使用生理鹽水或其他適當的緩衝(chong) 液洗滌組織，然後將其剪成約1mm大小的小塊。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩衝(chong) 液中，進行消化。消化時間可根據具體(ti) 實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

‌四、吹打分散後，過濾、計數‌：將消化後的細胞吹打到一個(ge) 離心管中，然後過濾、計數。

五、‌按30萬(wan) /毫升分瓶培養(yang) ‌：將計數後的細胞按30萬(wan) /毫升的濃度分瓶培養(yang) 。

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