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1、加樣
在中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,並注意不可濺出,不可產(chan) 生氣泡。 加標本一般用微量加樣器,按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴,以免發生交叉汙染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規定的稀釋度稀釋後再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標本,然後在微型震蕩器上震蕩1分鍾以保證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。
2、標本的采取和保存
可用作ELISA測定的標本十分廣泛,體(ti) 液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體(ti) 或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清、尿液),有些則需經預處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為(wei) 標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等於(yu) 血清。製備血漿標本需借助於(yu) 抗凝劑,而血清標本隻要待血清自然凝固即可取得。除特殊情況外,在醫學檢驗中均以血清作為(wei) 檢測標本。在ELISA中血漿和血清可同等應用。血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會(hui) 釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為(wei) 標記的ELISA測定中,溶血標本可能會(hui) 增加非特異性顯色。
血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌汙染,菌體(ti) 中可能含有內(nei) 源性HRP,也會(hui) 產(chan) 生假陽性反應。如在冰箱中保存過久,其中的可發生聚合,在間接法中可使本底加深。一般說來,在5天內(nei) 測定的血清標本可放置於(yu) 4℃,超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解後,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉澱的血清標本應先離心或過濾,澄清後再檢測。反複凍融會(hui) 使抗體(ti) 效價(jia) 跌落,所以測抗體(ti) 的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑。
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